Generell information

Projektet avsåg att i mus- och råttmodeller studera sjukdomar som Multipel skleros och Guillain Barrés syndrom. För detta ändamål användes modeller som orsakar experimentell autoimmun encephalomyelit (EAE) och experimentell autoimmun neurit (EAN). Syftet vara att nå ökad kunskap om de cellstrukturer och mekanismer som ligger bakom EAE, hitta nya behandlingsmetoder samt att studera eventuell koppling mellan EAE och kost. Utöver grundgodkännandet har tillägg godkänts avseende:

1. tillägg av djuravdelning,
2. försök avseende mekanismer bakom celldöd och inflammation vid prematur födsel,
3. avbildning (imaging) och nervstimulering
4. dels möjlighet att testa nya behandlingsmetoder vid EAN, dels tillägg av 10 000 möss för avel och försök.

När den regionala djurförsöksetiska nämnden godkände grundansökan fattades beslut om utvärdering i efterhand avseende:

1. Antal djur och för vilket/vilka försöksupplägg som FCA (Freund’s complete adjuvant) har använts. Samt: Har FCA kunnat ersättas av mildare adjuvant?
2. Antal djur som nått avbrytningspunkten score 4 (bedömningsskalan för neurologiska symtom) under 1 dygn.
3. Antal djur som nått score 3 (bedömningsskalan för neurologiska symtom) i mer än två dygn i sträck.
4. Efter immunisering, hur många djur behövde tas ur försök/avlivas p.g.a. att såret vid svansroten är infekterat eller för djupt 1 vecka efter immunisering?
5. Antal djur och anledningar till avbrytande av försök p.g.a. uppnådda avbrytningspunkter.

Försöksledaren (FL) har lämnat följande svar på de ställda frågorna:

1. 2420 möss i EAE försök, i vilka FCA inte gick att ersätta. I EAE försök på råtta (10 st.) kunde Freund’s Incomplete Adjuvant användas.
2. 72 möss och 0 råttor
3. 1766 möss och 7 råttor
4. 48 möss och 0 råttor
5. För EAE modellen: Djur får gå maximalt fyra dagar med 25% viktnedgång och inom 10 dagar ska viktnedgången ha återhämtats till max. 15%, annars avlivas djuren. Antal djur: möss 119; råttor 0.
   Avbrytningspunkten är 0.4p för djur dagarna mellan immunisering och uppvisande av symtom (med immuniseringsrelaterade sår undantaget). Antal djur: inga djur. Avbrytningspunkten är 1.6 inkluderande 0.4p på parametern vikt på KI:s utökade mall för bedömning av djurhälsa under 14 dagar när djuren uppvisar neurologiska symtom. Antal djur: möss 0; råttor: 2 (p.g.a. blod i urin). Alla djur som togs bort hade antingen viktnedgång högre än 25% eller score 4 i 24 timmar, d.v.s. inga djur togs bort av andra anledningar under den perioden. Efter 14 dagar sänks avbrytningspunkt till 1.2p (inkluderande vikt parameter). Antal djur: möss 65; råttor 0.

Följande planerade delförsök genomfördes inte:

• Mus: metabola studier
• Råtta: Benmärgstransplantation, modifierad diet, metabola studier, benmärgstransplantation samt avbildning av substansspridning med EAE/EAN.

Beträffande tillägget avseende mekanismer bakom celldöd och inflammation vid prematur födsel meddelar FL att försöket avslutades efter användning av 23 möss eftersom de förväntade effekterna, som ses hos vuxna djur med EAE, uteblev hos de prematura mössen.

Antal sökta djur och antal använda djur

Grundgodkännandet medgav användning av 10 000 möss och 4000 råttor. I ett senare tillägg medgavs användning av ytterligare 10 000 möss för avel och försök. Totalt kom 6717 möss och 142 råttor att användas i försök. FL meddelar att 11642 möss användes för avel. Använda råttor inköptes från uppfödare.

Bedömning av svårhetsgrad

FL föreslog avsevärd svårhetsgrad, vilket fastställdes av den djurförsöksetiska nämnden. Vid den retrospektiva bedömningen av svårhetsgraden placerades 2809 möss i terminal/organ, 635 i ringa, 972 i måttlig och 2420 i avsevärd svårhetsgrad. För råtta gäller 119 i terminal/organ, 4 i ringa, 9 i måttlig samt 10 i avsevärd svårhetsgrad. FL anger att samtliga djur som använts i EAE modeller bedömdes som avsevärd svårhetsgrad, medan benmärgstransplantationer och flera upprepade ringa procedurer på samma djur bedömdes som måttlig samtidigt som de djur som endast utsattes för administrering av substanser bedömdes som ringa svårhetsgrad.

Måluppfyllelse

Studieresultaten har lett till, dels nya hypoteser för den fortsatta forskning, dels insikter som påverkar framtida val av musstammar som bättre efterliknar den sjukdom som ses hos människa. Studien har resulterat i sju vetenskapliga artiklar.

3R

FL anför följande beträffande vidtagna åtgärder som ligger i linje med 3R-konceptet:

• Genom användning av, dels CRISPR-teknik, dels vävnad från djur i andra projekt har antalet använda djur kunnat reduceras.
• Genom titrering av använda immunogen i EAE försöken erhölls en mer precis sjukdomsbild, vilket minskat onödigt lidande.
• Genom användning av svansfri hantering minskades stress vid hantering av djuren.

Övriga kommentarer

-

Etablerad rapportstandard